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血清的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)及實(shí)際篩選血清方法
點(diǎn)擊次數(shù):880 更新時(shí)間:2023-07-10

血清的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn):

  1. 內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)為不高于5EU/ml

  2. 總蛋白含量胎牛血清一般范圍是30-40mg/ml,數(shù)值偏高偏低都會(huì)影響實(shí)驗(yàn)的正常進(jìn)行

  3. 血紅蛋白標(biāo)準(zhǔn)為不高于20mg/dl

  4. pH。國(guó)產(chǎn)血清、大多高于7.5,進(jìn)口胎牛血清,大多低于7.5,根據(jù)PH的高低可用來(lái)初步鑒別血清的來(lái)源

  5. 微生物。包括細(xì)菌、霉菌、支原體、噬菌體、各類病原性病毒等,大多都能清除。大腸桿菌噬菌體無(wú)法過(guò)濾,很難徹di 清除,但對(duì)血清質(zhì)量影響不大。病原性病毒,在國(guó)產(chǎn)血清中幾乎90%以上都存在,是影響國(guó)產(chǎn)血清質(zhì)量的重要原因之一


在實(shí)際篩選時(shí),主要從血清外觀和實(shí)驗(yàn)操作時(shí)細(xì)胞的生長(zhǎng)狀態(tài)進(jìn)行。

一、從外觀上:

  1. 顏色:根據(jù)血紅蛋白含量的不同,胎牛血清可表現(xiàn)出黃色或紅色,這個(gè)指標(biāo)的意義在于能體現(xiàn)出采血過(guò)程的嚴(yán)謹(jǐn)規(guī)范程度。胎牛血清或多或少總有點(diǎn)溶血,因?yàn)樘ヅQ迥δ懿?,紅細(xì)胞容易破裂;

  2. 澄清度:高質(zhì)量的胎牛血清由于蛋白和脂類等物質(zhì)含量低,表現(xiàn)為稀薄、清淡;

  3. 血清沉淀:血清中的沉淀是由纖維蛋白的凝聚產(chǎn)生,對(duì)血清質(zhì)量沒(méi)有影響,沉淀的產(chǎn)生原因跟加工生產(chǎn)方式、是否反復(fù)凍融密切相關(guān),在實(shí)驗(yàn)操作中可能會(huì)對(duì)細(xì)胞觀察產(chǎn)生影響。

二、從性能上:

  1. 細(xì)胞形態(tài),在進(jìn)行血清篩選時(shí)首先觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)形態(tài)是否產(chǎn)生明顯變化,以及觀察貼壁細(xì)胞的貼壁情況,細(xì)胞在不同血清培養(yǎng)中可能會(huì)出現(xiàn)形態(tài)上的差異;

  2. 倍增時(shí)間,一般情況下會(huì)選擇倍增時(shí)間短的血清,值得注意的是血清的影響會(huì)傳至5代,在進(jìn)行測(cè)試時(shí),最好培養(yǎng)五代后進(jìn)行計(jì)倍增時(shí)間的計(jì)算;

  3. 克隆形成率,測(cè)試時(shí)一般選50、100、200個(gè)細(xì)胞進(jìn)行平板克隆測(cè)試,平均5d左右換一次液,兩周后染色計(jì)數(shù),對(duì)比克隆形成情況。



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